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葡萄酒中苯甲酸两种检测方法出现不同检测结果的分析
发布时间：2013-11-25
《葡萄酒》国家标准中规定了苯甲酸及苯甲酸钠的限量是≤50mg/L。检测方法采用气相色谱和液相色谱检测两种方法。控制苯甲酸及苯甲酸钠限量的目的是对葡萄酒酿造工艺的质量控制。本文通过不同检测方法之间苯甲酸含量测试结果存在偏差进行探讨分析，旨在引起同行注意。
关键词：检测方法不同结果分析
笔者从事产品质量检验多年，在葡萄酒的质量检验工作中，发现采用GB/T5009.29苯甲酸测定方法中第一法和第二法检测的数据有很大的出入，经过多次反复测试验证，现象依旧存在，我们对发现的问题进行了比对分析，希望能够引起同行们的关视，不当之处请同行批正。测试情况如下：
1·检验方法及步骤
我们对3个酒样按照GB/T5009.29-2003中第二法液相色谱法规定的方法分别进行了处理和分析，发现只有一个样品检出苯甲酸，检测过程中发现基线噪声干扰较大，开始认为样品没处理好，之后对样品加热近干，进行定容过滤，经测试，弱偏低于第一次测试数据，基线噪声干扰没有改善。随后又用了第一法气相色谱法对样品进行了处理测定，经检测三个样品均检出了苯甲酸，经过加标回收试验，回收率在70%-76%范围以内，方法分别如下：
1.1液相色谱法
1.1.1试剂：
①甲醇色谱纯经0.45um有机相滤膜过滤，超声脱气；
②稀氨水（1:1）；
③乙酸铵溶液0.15mol/L经0.45um水相滤膜过滤，超声脱气；
④苯甲酸溶液国家二级标准溶液。
1.1.2仪器：
①岛津LC20高效液相色谱仪（双泵带紫外检测器）；
②超声波清洗机；
③电子天平；
④移液管等。
1.1.3分析步骤
①试样处理：分别称取10g试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调PH约7.0，加水定容至10ml，经0.45um滤膜过滤备用。
②分析条件：
a紫外检测器230nm波长0.2AUF；
b色谱柱：岛津C184.6-15010um不锈钢柱；
c流动相：甲醇：乙酸铵（5:95）；
d流速：1ml/min；
e进样量：10ul。
1.1.4检测结果
0.1mg/mL苯甲酸溶液做单标点曲线
样01样02样031
8.3mg/l未检出未检出
检测过程中发现基线噪声干扰较大，开始认为样品处理不到位，后重新对样品加热至近干，其他检测方法条件不变，发现样品因过度蒸发除苯甲酸有所损失以外，干扰并未多大改善。
1.2气相色谱法
1.2.1试剂
①乙醚：经检测不含过氧化物；
②石油醚；沸程30-60℃；
③盐酸：优级纯；
④无水硫酸钠；
⑤盐酸（1+1）：取100ml盐酸用水稀释至200ml；
⑥氯化钠酸性溶液（40g/L）；
⑦苯甲酸：国家标准物质99.9%；
⑧苯甲酸使用液：用石油醚-乙醚（3+1）混合溶液经多次稀释至：0、50、100、150、200、250ug制作曲线r=0.9996。
1.2.2仪器
①气相色谱仪：安捷伦7890A型，具氢火焰离子化检测器；
②色谱柱：食品添加剂检测专用柱5.3um*15m石英毛细柱（兰化）。
1.2.3分析步骤：吸取2.5ml混合均匀样品，置于25ml带塞量筒中，加0.5ml盐酸（1+1）酸化，用15ml、10ml乙醚提取两次，每次震摇1min，将上层乙醚吸入另一个25ml带塞量筒中，合并两次的提取液。用3ml氯化钠溶液洗剂两次，静止15min，用滴管将醚层通过无水硫酸钠虑入25ml容量瓶中，加乙醚定容，混匀。准确吸取5ml乙醚提取液于10ml刻度试管中，置40℃水浴挥干、加入2ml石油醚-乙醚混合溶剂溶解残渣，备用。
色谱条件：
①气体流速：氮气≥99.999%50ml/min
②温度：进样口230℃；检测器230℃，柱温170℃，不分流
③进样量2ul5min出峰标准曲线相关系数r=0.9996
1.2.4接测结果
样01样02样03
70mg/l19mg/l37mg/l
之后，为了慎重考虑，我们又将01#样品送省级质检机构检测，省级质检机构采用了液相色谱法，其检测结果为18mg/l。由以上结果可以看出，省级质检机构所检数据与我所液相方法测定数据接近，因此说明我所采用液相色谱法检测葡萄酒中苯甲酸含量是比较准确可行的。
2·结果分析
通过以上分析对比，我们分析如下：
2.1使用液相方法比较方便，但样品中干扰成分较多，导致基线噪声干扰较大，仪器检出限降低，再则由于液相色谱精度低于气相色谱精度，而葡萄酒中苯甲酸含量处于低微量级，就好像用台秤去称量几十克的物品一样，数据的系统误差当然出入较大。而气相色谱检测方法采用溶剂提取，有效地分离了干扰成分，基线噪声干扰降低，精度提高，加之气相色谱精度高，因此检测的数据较接近样品真值。
2.2液相色谱检测方法样品处理有损失，经查阅资料和实验证明，苯甲酸在酸性溶液中加热容易随水蒸气挥发，致使检出数据偏低。而气相检测方法处理样品采溶剂提取，通过回收率校正损失较小，因此检测数据比液相检测数据高。
3·探讨及建议
由此可以看出，GB/T5009.29中的液相色谱法并不适合于检测《葡萄酒》标准中规定的苯甲酸指标。但是在GB2760《食品添加剂使用卫生标》中规定葡萄酒苯甲酸含量≤800mg/kg，是作为食品添加剂来检测，其加入量远远大于《葡萄酒》标准中规定的苯甲酸含量，两个标准中的苯甲酸存在本质上的区别：即一个苯甲酸是自然产生的，含量低，不适合液相法检测；另一个是人为添加的，含量高，采用液相法能够满足要求。看来，选用哪个方法测试葡萄酒中的苯甲酸，我们只能按照产品标签的配料表来选择了。建议相关标准起草部门研究制定发布新的检测方法，规范指导检验检测行为。
