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动物源食品中8种糖皮质激素类药物残留检测方法――超高效液相色谱一串联质谱法(一）
发布时间：2017-09-01
1、安全要求
实验操作时穿工作服、戴口罩和手套；提取和净化操作都应在通风橱中进行，避免溶剂气体吸人和皮肤接触；废弃的化学试剂收集到专用容器中集中处理。
2、急救措施
皮肤接触到有机溶剂或酸、碱溶液后用清水清洗，有机溶剂或酸、碱溶液溅入眼中用清水灌洗。
3、适用范围
该标准操作规程适用于猪、牛、羊的肝脏和肌肉、鸡肌肉、鸡蛋、牛奶中泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松、氟氢可的松、甲基泼尼松、倍氯米松和氢化可的松单个或多个药物残留量的检测。
4、职责
进行该项检验的检验员必须按该标准操作规程进行检验，质量监督员负责监督该标准操作规程的正确执行。
5、检测原理
组织样品经碱水解，乙酸乙酯提取，牛奶和鸡蛋样品直接用乙酸乙酯提取，提取液用Silica柱净化，超高效液相色谱一串联质谱法进行检测，外标法定量。
6、方法灵敏度
泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松、倍他米松在牛奶中的定量限为0.2μg/L，肌肉和鸡蛋中定量限为0.5μg/kg,肝脏中定量限为1μg/kg；倍氯米松和氟氢可的松在牛奶中定量限为0.4μg/L，肌肉和鸡蛋中定量限为lμg/kg，肝脏中定量限为2μg/kg；氢化可的松在牛奶中定量限为O.8μg/L，肌肉和鸡蛋中定量限为2μg/kg，肝脏中定量限为4μg/kg。
7、注意事项
旋转蒸发至近干时，水浴温度不要太高，控制在约40℃。
8、材料、仪器、试剂的准备及基本要求除特别注明外，以下所用试剂均为分析纯；水为符合GB/T6682规定的一级水。
8.1 对照品、试剂和药物储备液、工作液
8.1.1 泼尼松对照品 纯度≥98％
8.1.2 泼尼松龙对照品 纯度≥99.5％
8.1.3 地塞米松对照品 纯度)99.5％
8.1.4 倍他米松对照品 纯度≥99.5％
8.1.5 氟氢可的松乙酸盐对照品 纯度≥98％
8.1.6 甲基泼尼松对照品 纯度≥99.5％
8.1.7 倍氯米松对照品 纯度≥99.5％
8.1.8 氢化可的松对照品 纯度≥99.5％
8.1.9 甲醇色谱纯
8.1.10 正己烷
8.1.11 乙腈色谱纯
8.1.12 乙酸乙酯
8.1.13 丙酮
8.1.14 甲酸
8.1.15 氢氧化钠
8.1.16 0.1mol/L氢氧化钠溶液 称取4.0g氢氧化钠，用水溶解，稀释定容至1 000mL。
8.1.17 正己烷一丙酮溶液(6/4，v/v)
8.1.18 0.1％甲酸溶液 移取1mL甲酸，用水定容至1000mL，摇匀即得。
8.1.19 标准储备液的配制(1mg/mL) 分别精密称取适量的糖皮质激素类药物标准品，用甲醇溶解定容，分别配制成1mg/mL的标准储备液。-200C冰箱中保存，有效期为6个月。
8.1.20标准工作液的配制(20ng／mL) 准确量取糖皮质激素类药物标准储备液各0.1mL，置于同一10mL量瓶内，用甲醇稀释至刻度，即为浓度为10μg/mL的标准溶液；从中准确量取0.1mL，置于一lOmL量瓶内，用甲醇稀释至刻度，即为浓度为100g/mL的标准工作液；从中准确量取2.OmL，置于一10mL量瓶内，用20％乙腈水溶液稀释至刻度，即成20ng/mL的标准工作液，现配现用。
8.2 仪器和设备
8.2.1 超高效液相色谱一串联质谱仪(配电喷雾离子源)
8.2.2 天平感量0.01g
8.2.3 分析天平感量0.00001g
8.2.4 高速冷冻离心机
8.2.5 振荡器
8.2.6涡旋混合器
8.2.7组织匀浆机
8.2.8氮吹仪
8.2.9旋转蒸发仪
8.2.10固相萃取柱Silica柱(500mg/6mL)，或相当者
9、检验步骤
9.1 试样的制备
9.1.1 取均质的供试样品，作为供试试料。
9.1.2 取均质的空白样品(2±0.02)g，作为空白试料(阴性对照)。
9.1.3 取均质的空白样品(2±0.02)g，添加20ng/mL标准工作液0.2mL，作为空白添加试样(阳性对照)。
9.2提取
9.2.1 组织样品
9.2.1.1称取组织试料(2±0.02)g于50mL离心管中，加乙酸乙酯15mL，涡旋混合，
8000r／min离心15min，移取乙酸乙酯层；于残渣中加0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL，混匀，加乙酸乙酯20mL，涡旋混合，低速摇床振动15min，8000r/min离心15min，移取乙酸乙酯层；合并两次提取液。
9.2.1.2 提取液于4023下旋转蒸至近干，加乙酸乙酯lmL和正己烷5mL，溶解残渣，待净化。
9.2.2 牛奶和鸡蛋样品
9.2.2.1 取牛奶或鸡蛋试料(2±0.02)g于50mL离心管中，加乙酸乙酯20mL，涡旋混合，低速摇床振荡15min，8000r/min离心15min。
9.2.2.2移取乙酸乙酯层于4023下旋转蒸至近干，加乙酸乙酯1mL和正己烷5mL，溶解残渣，待净化。
9.3净化
9.3.1 Silica小柱用正己烷6mL活化。
9.3.2取全部备用液过柱。
9.3.3 用正己烷6mL淋洗，减压抽干。
9.3.4 用正己烷一丙酮(6/4，v/v)6mL洗脱。
9.3.5 洗脱液于5023下氮气吹干。残余物用20％乙腈水溶液0.5mL溶解，转入1.5mL离心管中，15000r／min离心20min，取适量上清液，过滤膜后供超高效液相色谱一串联质谱法测定。
9.4 测定
9.4.1 色谱条件
9.4.1.1 色谱柱：BEH C1850mm×2.1mm(i.d.)，粒径1.7μm，或相当者；
9.4.1.2 柱温：30℃；
9.4.1.3 进样量：10μL；
9.4.1.4 流动相A：乙腈；
流动相B：0.1％甲酸水溶液；
流动相梯度洗脱条件见表1。
参考资料：兽药残留检测标准操作规程
