动物源食品中8种氨基糖苷类药物残留检测方法――超高效液相色谱一串联质谱法(一)

发布时间：2017-09-01

1、安全要求

实验操作时穿工作服、戴口罩和手套；提取和净化操作都应在通风橱中进行，避免溶剂气体吸人和皮肤接触；废弃的化学试剂收集到专用容器中集中处理。

2、急救措施

皮肤接触到有机溶剂或酸、碱溶液后用清水清洗，有机溶剂或酸、碱溶液溅入眼中用清水灌洗。

3、适用范围

该标准操作规程适用于牛奶、猪肌肉、猪肝脏和猪肾脏中链霉素、双氢链霉素、庆大霉素C_{1、卡那霉素、阿米卡星、大观霉素、安普霉素和新霉素8种氨基糖苷类药物单个或混合物残留量的确证检测。}

4、职责

进行该项检验的检验员必须按该标准操作规程进行检验，质量监督员负责监督该标准操作规程的正确执行。

5、检测原理

供试样品经磷酸二氢钾缓冲溶液提取后，调其pH值，经CBX固相萃取柱净化，浓缩后残余物用HFBA溶液溶解，供超高效液相色谱-串联质谱法测定。

6、方法灵敏度

链霉素、双氢链霉素、庆大霉素C_{1、卡那霉素、阿米卡星、大观霉素、安普霉素和新霉素在牛奶、猪肌肉、猪肝脏和猪肾脏中的检测限为5μg/kg，定量限为10μg/kg。}

7、注意事项

操作过程中尽可能用塑料试管，不用玻璃试管。

8、材料、仪器、试剂的准备及基本要求

除特别注明外，以下所用试剂均为分析纯；水为符合GB/T6682规定的一级水。

8.1对照品、试剂和药物储备液、工作液准备

8.1.1链霉素、双氢链霉素、庆大霉素C_{1、卡那霉素、阿米卡星、大观霉素、安普霉素和新霉素对照品 纯度均大于98.0％。}

8.1.2甲醇 色谱纯

8.1.3乙腈 色谱纯

8.1.4磷酸二氢钾

8.1.5三氯乙酸

8.1.6 Na_{2EDTA(含2个结晶水)}

8.1.7乙酸

8.1.8七氟丁酸酐(HFBA)

8.1.9 10mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(含0.4mmol/L EDTA和2％三氯乙酸) 称取2.72g磷酸二氢钾，溶解于2L水中，用lmol/L盐酸溶液调pH值至4.0；再加入0.3gNa_{2EDTA(含2个结晶水)和40g三氯乙酸，混匀即得。}

8.1.10 10％乙酸甲醇溶液量取5mL乙酸，溶于45mL甲醇中，混匀即得。

8.1.1 1 30％氢氧化钠溶液称取30g氢氧化钠，用水溶解并稀释至100mL，混匀即得。

8.1.12 1tool／L盐酸溶液取9mL盐酸，加水稀释至100mL，混匀即得。

8.1.13 5mmol/L七氟丁酸酐(HFBA)取0.25mL HFBA，加水稀释至200mL，混匀即得。

8.1.14氨基糖苷类药物标准储备液(1mg/mL) 准确称取适量的链霉素、双氢链霉素、庆大霉素C_{1、卡那霉素、阿米卡星、大观霉素、安普霉素和新霉素标准品，用水分别配制成lmg/mL的标准储备液。配制完后都转移至塑料试管内于4℃下保存，有效期为1个月。}

8.1.15氨基糖苷类药物混合标准工作液(10μg/mL) 分别准确吸取1.0mL的链霉素、双氢链霉素、庆大霉素C_{1、卡那霉素、阿米卡星、大观霉素、安普霉素和新霉素标准储备液至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀即得。配制完后转移至塑料试管内于4℃下保存，有效期为1个月。}

8.2仪器和设备

8.2.1 超高效液相色谱-串联质谱仪(配电喷雾离子源)

8.2.2分析天平 感量0.00001g

8.2.3天平 感量0.01g

8.2.4涡旋混合器

8.2.5高速离心机

8.2.6 pH计

8.2.7固相萃取装置

8.2.8 cBX固相萃取柱500mg/6mL，或相当者；

8.2.9氮吹仪

9、检验步骤

9.1试样的制备

9.1.1 取均质的供试样品，作为供试试料。

9.1.2取均质的空白样品(2±0.02)g，作为空白试料(阴性对照)。

9.1.3 取均质的空白样品(2±0.02)g，添加4μg/mL标准工作液0.1mL，作为空白添加试样(阳性对照)。

9.2提取

9.2.1称取(2±0.02)g试料，加10mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液(含0.4mmol/L ED-TA和2％三氯乙酸)8mL，涡旋混合后，中速振荡提取5min，10000r/min离心10min，取上清液于另一50mL离心管内。

9.2.2重复提取一次，合并上清液；调其pH值至7.5～8.0，10000r/min离心10min，取上清液作为备用液。

9.3净化

9.3.1 CBX小柱依次用甲醇、水各3mL活化。

9.3.2取全部备用液过柱，控制流速为1～3mL/min。

9.3.3用水5mL以同样速度淋洗柱子，抽干。

9.3.4用10％乙酸甲醇溶液3mL洗脱于塑料试管内。

9.3.5洗脱液于40^{0C下氮气吹干。}

残余物加入5mmol/HFBA水溶液0.2mL，充分涡旋混匀；转至1.5mL塑料离心管内，15000r/min离心10min，取适量上清液供超高效液相色谱一串联质谱仪测定。

9.4测定

9.4.1色谱条件

9.4.1.1色谱柱：BEH C_{1850mm×2.1mm(i.d.)，粒径1.7μm，或相当者；}

9.4.1.2柱温：30^0C；

9.4.1.3进样量：10μL；

9.4.1.4流动相A：20mmol/L HFBA乙腈溶液；

流动相B：20mmol/L HFBA水溶液；

流动相梯度洗脱条件见表1。

9.4.2质谱条件

9.4.2.1离子源参考参数，见表2。

9.4.2.2质量分析器参考参数见表3。

9.4.2.3 光电倍增器电压：650V

9.4.2.4 定性、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表4。

参考资料：兽药残留检测标准操作规程

本文由乔科化学&云试剂商城整理编辑，如有侵权请联系删除