生化分析仪的性能检定
发布时间：2017-09-01
自动生化分析仪是由光学、精密机械、电子与计算机技术紧密结合而成的光谱仪器，其结构复杂、技术含量和要求精度高。为了保证生化分析仪分析结果的重复性和准确性，必须对新购买或正在使用的仪器进行性能评价。国家食品药品监督管理局2009年6月1日正式实施的《YY/T0654-2008全自动生化分析仪》医药行业标准对全自动生化仪的硬件性能提出了具体要求并推荐了检定的方法。
1．杂散光 首先对仪器进行光电校正(Photocal)，随后在仪器的诊断状态下，用50g／L亚硝酸钠溶液作为测定物质，用加样器将溶液直接加入比色杯进行比色，测其在生化仪上相对于蒸馏水在340nm处的吸光度；亦可采用空气作参比，在340nm处测定JB400型截止型滤光片的吸光度，其值应不小于2.3。
2．温度准确度测定分析仪预热自动进入Standby状态，确保在室温18～32℃范围内，且控制电脑显示屏上显示的孵育温度介于36.8～37.2℃之间，通过加样孔向比色杯中加入500µl去离子水，5分钟以后温度稳定。将经过标定精度不低于0.1℃温度的检测仪探头固定，确保它和杯底、杯壁都有一定的距离，每隔30秒读数一次，连续观察20次液晶显示屏上的温度显示值并记录。求出平均温度和20次显示值中最大值与最小值之差，即温度波动度。温度应在设定值的±0.3℃内，波动度不大于±0.2℃。
3．吸光度线性范围检定对分析仪340nm和450～520nm范围内任一波长进行线性范围测定，各个波长的色素原液的配制见表19-1(溶剂中可加表面活性剂0.01％TritonX-100等)，色素原液的吸光度应比分析仪规定的吸光度上限高5％左右。
用相应的稀释液将色素原液按0／10、l／10、2／10、3／10、4／10、5／10、6／10、7／10、8／10、9／10、10／10的比例稀释，共获得11个浓度梯度。各梯度的色素液在分析仪上重复测定5次吸光度，计算平均值。以稀释比例为横坐标，吸光度平均值为纵坐标，画出散点图，用最小二乘法先对前4个点进行线性拟合，并按照下列公式计算5～11点的相对偏倚。
式中：A为某浓度点实际测定的吸光度平均值，a为线性拟合的截距，b为线性拟合的斜率。
式中：A为某浓度点实际测定的吸光度平均值，C为相对浓度，n为选定的测定点数。
各测定值的相对偏倚在±5％范围内的最大吸光度应不小于2.0。
4．吸光度稳定性检定对分析仪340nm和600～700nm波长范围内任一波长进行吸光度稳定性检测。340nm吸光度为0.5(蒸馏水为空白，允许偏差为士5％)的重铬酸钾标准溶液，600～700nm波长范围内任一波长的测定溶液吸光度为0.5(蒸馏水为空白，允许偏差为±5％)的硫酸铜标准溶液。设定仪器的试剂量为分析仪标称的最小试剂量、样本量为标称的最小样本量，反应时间为仪器标称的最长反应时间或10分钟，读数间隔为仪器的测定周期或30秒，测定上述溶液的吸光度，计算其中吸光度最大值与最小值之差，其变化应不大于0.01。
5．吸光度准确度检定 以蒸馏水作空白对照，以分析仪上测定340nm处吸光度分别约为0.5和1.0(均以蒸馏水为空白对照，允许偏差为±5％)的重铬酸钾标准溶液。重复测定3次，计算3次测量值的算术平均值与标准值之差。吸光度为0.5的允许误差为±0.025，吸光度为1.0的允许误差应为±0.07。
6．吸光度重复性检定 对分析仪340nm波长进行吸光度重复性测定。测定溶液340nm吸光度为0.5(蒸馏水为空白对照，允许偏差为土5％)的重铬酸钾标准溶液。重铬酸钾标准溶液同时作为样品和试剂，溶液的加入量为分析仪标称的最小反应体积，反应时间为分析仪标称的最长反应时问或10分钟，连续测定20次，观察并记录这20条反应曲线的最后一个读点的吸光度，计算该点吸光度的变异系数CV，应不大于1.5％。
7．试剂加样精确度与重复性检定 采用称量法检测。将生化仪、蒸馏水等置于恒温、恒湿的实验室内平衡数小时，准备一带盖且先盛有适量蒸馏水的容器并盖上盖子防止水分蒸发，在分度值为0.01mg的电子天平上调零。控制试剂针或样本针往该容器中加入规定量的除气蒸馏水，盖上盖子再称重。每种规定加入量重复称量20次，求出均值并除以当时温度下蒸馏水的密度得到实际加入量(µl)，计算加样误差：
加样误差=(实际加入量一规定加入量)／规定加入量×1000%。
仪器标称的试剂最小、最大加样量，加样准确度误差应不超过士5％，变异系数应不超过2％。
8．样品加样准确性与重复性检定 可以采用比色法和称量法两种检测方式。称量法与试剂加样精确度与重复性检定类似。比色法是用分度值0.1mg以下的电子天平称取橘红G(orange G)粉末0.35g加入10ml质控血清中慢慢溶解混匀制成色素原液并测定其比重。
将色素原液加入样品杯，按仪器加样量设定范围分别设定最大加样量M1、最小加样量M2，将色素原液重复5次加注不同比色杯中，手工将比色杯内色素原液用纯水回收到10ml容量瓶中定容，在分光光度计上(478±1)：nlrl测定定容后的吸光度A1；同时，将约lml色素原液准确稀释Dr倍后同样用分光光度计测定其吸光度Ar。计算实际样品加注量：
实际加注样品体积=(M1×A1)／(Dr×Ar)。
计算加样变异系数和加样误差，结果应符合表19―2的要求。
9．样品携带污染率检定 用正常人血清溶解适量橘红G，配制340rim吸光度约为200的原液。将该原液准确稀释200倍，在分析仪上测定稀释液在340nm相对于去离子水的吸光度。重复测定20次，计算出平均值，乘以稀释倍数获得橘红G原液的理论吸光度。以去离子水为试剂，以橘红G原液和去离子水为样品，样品的加入量为分析仪标称的最大样品量，按照原液、原液、原液、去离子水、去离子水、去离子水的顺序为一组，在分析仪上测定上述样品反应结束时的吸光度，共进行5组测定。每一组测定中，第4个样品的吸光度为A14，第6个样品的吸光度为Ai6为该测定组的序号，按照如下公式计算携带污染率：
并求出5组的平均携带污染率，其值应小于0.5％。
10．临床项目批内与批问精密度检定采用两个水平的质控血清，针对不同的检测项目，参照试剂盒质量评价时测定批内与批问精密度的方式，对不同项目采用某种试剂时的批内与批问平均值、SD值及CV值。如ALT<40U/L时CV≤5％、UREA<10mmol/L，时CV≤2.5％、TP 50．0～70．0g/L，时CV≤2.5％方可满足要求。
11．其他性能检定 如ISE单元的电极选择性等也可用厂家提供的电极选择性测试专用试剂进行检定。
参考资料：分析化学
