鸡肉和猪肉中四环素类药物残留检测方法――高效液相色谱一串联质谱法(一)

发布时间：2017-09-01

1、安全要求

实验操作时穿工作服、戴口罩和手套；提取和净化操作都应在通风橱中进行，避免溶剂气体吸人和皮肤接触；废弃的化学试剂收集到专用容器中集中处理。

2、急救措施

皮肤接触到有机溶剂或酸、碱溶液后用清水清洗，有机溶剂或酸、碱溶液溅人眼中用清水灌洗。

3、适用范围

该标准操作规程适用于鸡肉和猪肉组织中四环素、土霉素及金霉素单个或混合物残留量的确证检测。

4、职责

进行该项检验的检验员必须按该标准操作规程进行检验，质量监督员负责监督该标准操作规程的正确执行。

5、检测原理

试料中残留的四环素、土霉素及金霉素经缓冲液提取，HLB柱净化。用高效液相色谱一串联质谱法测定，外标法定量。

6、方法灵敏度

四环素、土霉素和金霉素在鸡肉和猪肉组织中的检测限为5μg/kg，定量限为10μg/kg。

7、注意事项

除特别说明外，淋洗和洗脱过程中应避免萃取柱柱床干涸。

8、材料、仪器、试剂的准备及基本要求

除特别注明外，以下所用试剂均为分析纯；水为符合GB/T6682规定的一级水。

8、1 对照品、试剂和药物储备液、工作液准备

8、1.1 盐酸土霉素 含盐酸土霉素(C_{22H25C1N209) 不得少于96％。}

8、1.2 盐酸四环素 含盐酸四环素(C_{22H24C12N208) 不得少于97％。}

8、1.3 盐酸金霉素含盐酸金霉素(C_{22H24C12N2O8) 不得少于83％。}

8、1.4 柠檬酸(C_6H8O7・H2O)

8、1.5 磷酸氢二钠(Na_{2HPO4・12H2O)}

8、1.6 乙二胺四乙酸二钠(C_{10H14N2Na2O8・2H2O)}

8、1.7 氢氧化钠

8、1.8 甲醇色谱纯

8、1.9 甲酸

8、1.10 乙腈色谱纯

8、1.11 1mol/L氢氧化钠溶液 取氢氧化钠4g，加水溶解并稀释至100mL，即得。

8、1.12 Mcllvaine-Na_{2EDTA缓冲液的配制 分别取柠檬酸12.9g，磷酸氢二钠10.9g，乙二胺四乙酸二钠37.2g，加水900mL溶解，用lmo/L氢氧化钠溶液调pH值至3.8，加水稀释至1000mL，即得。}

8、1.13标准储备液配制(1mg/mL) 准确称取约11.16mg盐酸四环素、10.95mg盐酸土霉素和10.87mg盐酸金霉素对照品，精密称定，分别置于同一10mL容量瓶内，用甲醇溶解并稀释成浓度均为lmg/mL的溶液，作为标准储备液。置-20℃冰箱中保存，有效期为1个月。

8、1.14标准工作液配制(1μg/mL) 精密量取标准储备液0.1mL，置于一lOmL容量瓶中，用甲醇一水溶液(3+7，v/v)稀释成浓度为10μg/mL的标准溶液；从中准确量取1.OmL，置于一10mL容量瓶中，用甲醇一水溶液(3+7，v/v)稀释成浓度为1μg/mL的标准溶液。置一20^{0C冰箱中保存，有效期为1个月。}

8、2 仪器和设备

8、2.1 高效液相色谱一串联质谱仪(配电喷雾离子源)

8、2.2 组织匀浆机

8、2.3 分析天平感量0.000 01g

8、2.4 天平感量0.01g

8、2.5 涡旋混合器

8、2.6 水平振荡器

8、2.7 高速离心机

8、2.8 酸度计

8、2.9 离心管50mL

8、2.10固相萃取柱HLB小柱(60mg/3mL)

8、2.11 样品浓缩器

8、2.12 微孔滤膜孔径0.45μm

9 检验步骤

9、1 试料的制备

9、1.1 取匀浆后的供试样品，作为供试试料。

9、1.2 取匀浆后的空白样品(2±0.02)

9、1.3 取匀浆后的空白样品(2±0.02)

添加试料(阳性对照)。

9、2 提取

9、2.1 取10000r/min匀浆1min的试料1和试料2各(2±0.02)g，置于50mL离心管中，加Mcllvaine-Na_{2EDTA缓冲液8mL，涡旋混匀，8000r/min离心10min，倾出上清液另一离心管内。}

9、2.2 再用Mcllvaine-Na_{2EDTA缓冲液8mL重复提取一次，合并上清液，作为备用液。}

9、3净化

9、3.1 固相萃取柱依次用甲醇5mL、水5mL预洗活化。

9、3.2 取备用液8mL过柱，用水5mL、5％甲醇水5mL淋洗，减压抽干。

9、3.3 用甲醇5mL洗脱，减压抽干，氮气吹干洗脱液(水浴温度低于40％)。用甲醇一

水(3+7，v/v)1.0mL溶解残余物，涡旋混匀，过滤膜后供高效液相色谱一串联质谱仪测定。

9、4测定

9、4.1色谱条件

9、4.1.1 色谱柱：XBridge C1_{8150mm×2.1mm(i．d．)，粒径5μm，或相当者。}

9、4.1.2 柱温：20℃。

9、4.1.3 进样量：20μL。

9、4.1.4 流动相A：0.3％甲酸乙腈溶液。

流动相B：0.3％甲酸水溶液。

流动相梯度见表1。

9、4.2 质谱条件

9、4.2.1 离子源参考参数见表2。

9、4.2.3 光电倍增器电压：650V。

9、4.2.4 四环素类药物的定性、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量见表4。

参考资料：兽药残留检测标准操作规程